类风湿因子(Rheumatoid factor, RF)是一种以人或动物变性IgG的Fc片段为靶抗原的自身抗体,常见于类风湿患者、其它自身免疫性疾病、感染性疾病甚至健康人血液中。总人群中1-4%可检测到RF,而65岁以上成年人群中75%可检测到RF。根据其结构可分为IgA-RF、IgG-RF、IgM-RF和IgE-RF。
人血清中的RF分别与固相抗体和标记抗体结合,形成固相抗体-RF-标记抗体,从而导致假阳。RF对双抗夹心免疫的负干扰报道较少,其机理可能是RF与固相抗体或标记抗体中的某一抗体结合时,产生空间位阻,从而导致假阴性。对捕获法IgM检测,可因捕获非特异性RF-IgM后与标记抗体结合导致假阳,或直接形成特异性捕获抗体-RF-标记抗体复合物导致假阳。RF抗原决定簇与变性IgG Fc端互补结合具有随机性。
RF既可引起假阳性,可以引起假阴性。若怀疑样本中存在RF干扰,可通过样本连续稀释、添加回收、不同厂家试剂比较以及临床病史等方法进行确认。
异嗜性抗体(Heterophil antibody, HA)是由已知的或未知的抗原物质刺激人体产生的一类具有足够滴度、能与多个物种的免疫球蛋白发生相对较弱的结合的多重特异性免疫球蛋白,有IgG、IgA、IgM等类型。嗜异性抗体干扰的程度、频率与患者的疾病状态、年龄、性别等无关。
嗜异性抗体可造成假阳性,也可造成假阴性,当怀疑样本中存在HA干扰时,可使用与检测/捕获抗体亚型一致的动物Ig或者使用阻断剂进行排除。
自身抗体(Autoantibodies)是针对自身抗原成分产生的一类抗体,可能与恶性疾病或自身免疫功能紊乱有关。如抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素、抗甲状腺激素抗体等,能与相应靶抗原形成复合物。作用机理类似于RF,为特异性结合。
测定前需用理化方法将其解离后再测定。不同浓度的PEG可沉降不同分子量大小的蛋白,可用于消除自身抗体引起的干扰。
补体(Complement)是一种血清蛋白质,存在于人和脊椎动物血清及组织液中,不耐热,活化后具有酶活性,可介导免疫应答和炎症反应。免疫检测系统中,抗体固相包被或标记导致抗体分子发生变构,其Fc段的补体C1q分子结合位点暴露,C1q桥联导致假阳。
补体干扰的排除可用终浓度为10~40 mmol/L 的EDTA溶液处理样本,或样本53℃加热10 min灭活C1q。
标本溶血时会释放出血红蛋白、胰岛素降解酶、铁蛋白等,干扰测定结果。对于溶血,实验室可通过设置适当的副波长或采用Hb单克隆抗体处理样本,以减少干扰。样本中胆红素通过本底干扰、光谱干扰影响测定结果。对于黄疸引起的干扰,临床实验室常可通过设置合适的副波长,或对样本进行预稀释来减少黄疸对检测结果的干扰。脂血是临床检验中一种常见的干扰检测的样本性状,是影响检测结果的重要分析前因素。发生脂浊的血清样本中含有大量的乳糜微粒和极低密度脂蛋白,其对检测结果的干扰主要是由于乳糜微粒具有光散射的特性,会产生浊度,从而影响反应的吸光度值或使产物的颜色发生变化。高速离心法、血
清稀释法、0.9%氯化钠溶液稀释法均可去除乳糜。
溶菌酶与等电点较低的蛋白质(Ig等电点为5)具有强的结合力。Cu2+和卵蛋白可有效地封闭溶菌酶,防止其桥联,导致假阳。加入适量的动物血清或BSA或者氨基酸可有效封闭非特异性结合位点,消除因非特异性吸附引起的干扰。
在IVD试剂开发中,不同的原料以及缓冲液体系对不同的干扰物质有不同的敏感度,需要研发人员通过实验去识别,然后采取相对应的措施,将干扰的影响降低到最小。